Resumo

Com a necessidade de reduzir significativamente os custos na produção de etanol, tem-se buscado a identificação de microrganismos adequados às características da matéria-prima e com capacidade de fermentar diferentes açúcares com fatores de conversão elevados. As técnicas moleculares vêm sendo amplamente utilizadas por fornecer informações detalhadas na identificação de potenciais microrganismos produtores de biocombustíveis. Zymomonas mobilis é uma bactéria gram-negativa que utiliza sacarose, glicose e frutose como fonte de carbono e energia, e vem despertando grande interesse biotecnológico e ambiental devido ao seu alto potencial fermentativo. Essa bactéria apresenta inúmeras vantagens na produção de etanol, quando comparada com as leveduras. Do ponto de vista taxonômico, Z. mobilis é a única espécie do gênero Zymomonas, e é subdivida em três subespécies: Z. mobilis subsp. mobilis, Z. mobilis subsp. pomaceae e Z. mobilis subsp. francensis. A diferenciação destas subespécies é baseada em testes fisiológicos, porém esses testes consomem tempo e são frequentemente duvidosos. Por isso, técnicas moleculares são propostas como uma alternativa rápida e confiável para identificação de microrganismos. O presente estudo teve como objetivo realizar a identificação molecular de 32 linhagens de Z. mobilis depositadas na Coleção de Microrganismos UFPEDA, através da análise do perfil de restrição do DNA ribossomal. As linhagens foram cultivadas em meio SSDL por 24 horas a 30º C, seguido de extração de DNA genômico. As reações de PCR foram realizadas com iniciadores e em condições específicas para a amplificação do gene 16S rDNA. Os produtos da PCR foram purificados e a identidade desses isolados foi confirmada por sequenciamento. As sequências foram analisadas pelo programa BLASTn e alinhadas pelo MultiAlin. Os perfis de restrição teóricos das endonucleases Hae III, StuI e NdeII foram gerados pelo WebCutter 2.0. A análise das sequências revelou o elevado grau de conservação no gene 16SrDNA, confirmando a relação de proximidade das linhagens de Zymomonas mobilis utilizadas neste estudo e a proximidade com a Z. mobilis subsp. mobilis LMG445, sugerindo que as linhagens estudadas pertencem a esta subespécie. O método baseado na análise do perfil de restrição do DNA ribossomal tratou-se de uma eficiente ferramenta para identificação molecular de Z. mobilis, podendo ser empregada como uma confiável alternativa para identificação desses microrganismos produtores de etanol.